分 離 純(chún) 化

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含(hán)有(yǒu)一(yī)種以上(shàng)的微生物(wù)培(péi)養物(wù)稱(chēng)為混和培養物(wù)（mixed culture）
。如果在(zài)一個(gè)菌(jūn)落中所有細(xì)胞均來自於(yú)一個親代(dài)細(xì)胞
，那(nà)麼(mó)這(zhè)個菌落稱為純培(péi)養（pureculture）
。在(zài)進行菌種(zhǒng)鑒定時
，所(suǒ)用的微生(shēng)物一般(bān)均(jūn)要(yào)求(qiú)為純的(dí)培養物
。得到(dào)純(chún)培養的(dí)過(guò)程稱為分離純化(huà)
，方(fāng)法有許多種(zhǒng)
。

１，傾(qīng)注(zhù)平板法(fǎ)

首(shǒu)先把微(wēi)生物(wù)懸液(yè)通(tōng)過一(yī)係列稀(xī)釋
，取(qǔ)一定量的(dí)稀(xī)釋(shì)液與(yǔ)熔(róng)化(huà)好(hǎo)的保(bǎo)持在40-50°左右的營(yíng)養瓊脂培養基(jī)充分混合(hé)
，然(rán)後(hòu)把(bǎ)這混(hùn)合(hé)液傾注(zhù)到(dào)無菌的(dí)培養皿中(zhōng)
，待凝固之後
，把這(zhè)平板倒置(zhì)在恒(héng)箱(xiāng)中(zhōng)培養
。單(dān)一細胞經(jīng)過多(duō)次增殖後(hòu)形成(chéng)一(yī)個(gè)菌落
，取單個(gè)菌落(là)製成懸液
，重復(fù)上述(shù)步(bù)驟數次(cì)
，便可得(dé)到(dào)純培養物
。

２，塗(tú)布平(píng)板法(fǎ)

首(shǒu)先把微(wēi)生物懸(xuán)液(yè)通(tōng)過(guò)適當(dāng)的稀釋
，取一定(dìng)量的稀(xī)釋(shì)液(yè)放(fàng)在無(wú)菌的已(yǐ)經(jīng)凝固(gù)的(dí)營(yíng)養(yǎng)瓊脂平(píng)板(bǎn)上
，然(rán)後用無菌的(dí)玻璃刮(guā)刀把稀釋液(yè)均匀地塗布在培養(yǎng)基表(biǎo)麵(miàn)上(shàng)
，經(jīng)恒溫培(péi)養便可以(yǐ)得(dé)到單個菌落
。

３，平(píng)板劃綫(xiàn)法(fǎ)

簡(jiǎn)單的分離微生(shēng)物(wù)的(dí)方(fāng)法是平板(bǎn)劃(huá)綫法
。用無(wú)菌的接種環(huán)取(qǔ)培養(yǎng)物少許在平(píng)板(bǎn)上進行劃綫
。劃(huá)綫的方(fāng)法很多
，常見的(dí)比(bǐ)較(jiào)容易出現(xiàn)單個(gè)菌落(là)的劃綫(xiàn)方法有斜綫法(fǎ)，曲綫法(fǎ)，方(fāng)格(gé)法，放射法(fǎ)，四(sì)格法等
。當接種環在培養基表麵(miàn)上(shàng)往後(hòu)移(yí)動時(shí)
，接種(zhǒng)環(huán)上的(dí)菌液(yè)逐漸稀釋(shì)
，最(zuì)後(hòu)在(zài)所劃的(dí)綫上分(fēn)散著單(dān)個細胞
，經培養
，每一個(gè)細胞(bāo)長成(chéng)一(yī)個菌落(là)
。

４，富(fù)集(jí)培(péi)養法(fǎ)

富集培養法(fǎ)的方法和原理非常(cháng)簡單
。我們(mén)可以(yǐ)創造一些條件(jiàn)隻讓所需(xū)的(dí)微生(shēng)物生長
，在(zài)這(zhè)些條件下
，所需(xū)要(yào)的(dí)微生物能有效(xiào)地(dì)與(yǔ)其他(tā)微生(shēng)物進(jìn)行(háng)競爭
，在生長能(néng)力方麵遠遠(yuǎn)超過(guò)其(qí)他(tā)微生(shēng)物(wù)
。如(rú)果要(yào)分(fēn)離(lí)一些專(zhuān)性(xìng)寄(jì)生(shēng)菌
，就必須(xū)把樣(yàng)品(pǐn)接(jiē)種(zhǒng)到相應敏(mǐn)感宿主細(xì)胞(bāo)群體中
，使其(qí)大量生長(cháng)
。通過(guò)多(duō)次重復(fù)移種(zhǒng)便可(kě)以得到純的寄(jì)生(shēng)菌
。

５，厭氧(yǎng)法

在(zài)實(shí)驗室中
，為(wéi)了(liǎo)分(fēn)離某(mǒu)些厭氧菌
，可以(yǐ)利(lì)用裝(zhuāng)有原培養基(jī)的(dí)試管作(zuò)為培(péi)養(yǎng)容器
，把這(zhè)支試管放(fàng)在沸水浴中加(jiā)熱(rè)數分鐘
，以(yǐ)便逐(zhú)出(chū)培(péi)養(yǎng)基中的(dí)溶(róng)解氧
。然(rán)後(hòu)快(kuài)速冷卻
，並進(jìn)行(háng)接(jiē)種(zhǒng)
。接(jiē)種後
，加入(rù)無菌的(dí)石蠟於培養(yǎng)基(jī)表麵
，使培養基與空氣(qì)隔絕(jué)
。另一種(zhǒng)方法是
，在接(jiē)種後
，利用(yòng)N2或CO2取(qǔ)代(dài)培(péi)養(yǎng)基中(zhōng)的氣(qì)體(tǐ)
，然後在火(huǒ)焰上把試管(guǎn)口密封
。有時(shí)為了(liǎo)更有效地分(fēn)離某些厭氧菌(jūn)
，可(kě)以(yǐ)把(bǎ)所(suǒ)分(fēn)離的(dí)樣(yàng)品接(jiē)種於(yú)培養(yǎng)基上
，然(rán)後再把培(péi)養(yǎng)皿(mǐn)放在(zài)*密(mì)封的厭(yàn)氧培養(yǎng)裝置(zhì)中
。

6，單細胞（或(huò)單孢子(zǐ)）分離(lí)法(fǎ)

是采取顯微分離法從(cóng)混雜群體中直接分離單(dān)個(gè)細胞(bāo)或(huò)單(dān)個(gè)個體進行(háng)培養(yǎng)以(yǐ)獲(huò)得純培養
。較(jiào)大的微生(shēng)物(wù)
，可采用毛細管(guǎn)提取(qǔ)單(dān)個個體(tǐ)
。個(gè)體(tǐ)相對較小的微生物
，需采用顯(xiǎn)微操作儀(yí)
，在(zài)顯微(wēi)鏡(jìng)下用毛細管或(huò)顯微針(zhēn)，鉤(gōu)，環等挑取(qǔ)單(dān)個微(wēi)生(shēng)物細(xì)胞(bāo)或(huò)孢子以獲(huò)得(dé)純(chún)培養
。單細(xì)胞分離(lí)法對操作技術有(yǒu)比較高的要求(qiú)
。

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